Odběr materiálu pro molekulárně mikrobiologické vyšetření

Vzorky pro průkaz nukleových kyselin infekčních agens metodou PCR odebírat a přepravovat podle odborných pokynů.

Pro získání validního výsledku je nutné biologický materiál určený k vyšetření odebrat do sterilních odběrových souprav. Při provedení odběru používat powder-free rukavice (bez pudru).

Vzorky musí být co nejdříve po odběru přepraveny a zpracovány laboratoří.

Výběr vhodné odběrové soupravy je možno telefonicky zkonzultovat s pracovníky laboratoře.

Odběrové soupravy s překročenou dobou exspirace nepoužívat!

Při podezření na chřipku či virus SARS-CoV-2 vzorek transportujte v nádobě s trojitým obalem a označte POZOR! VYSOCE INFEKČNÍ MATERIÁL.

Řádně vyplněná žádanka musí být vždy uložena MIMO bezpečně zabalený materiál.

Pokyny ke správnému odběru vzorku:

Moč

Indikace: Průkaz Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum, Trichomonas vaginalis

Odběr. souprava: Sterilní zkumavka bez konzervačních činidel

Objem: 5–10 ml

Příprava: Pacient před odběrem nesmí minimálně 2 hodiny močit.

Provedení odběru: Odebrat první proud moči.

Uchovávání: Při teplotě 2–8 °C, pokud to není možné, vzorek zamrazit a uchovávat při -15 °C a méně.

Transport: Při teplotě 2-8 °C, případně na ledu.

Stolice

Indikace: Průkaz přítomnosti DNA protozoárních střevních parazitů

Objem: 2–3 g (velikost lískového oříšku).

Příprava: Bez přípravy.

Provedení odběru: Po defekaci se odebere pomocí lopatičky, která je součásti soupravy, stolici o velikosti lískového oříšku. Pro vyšetření protozárních parazitů je ideální odběr opakovat 3x během 3–7 dní, neboť vyšetření se provádí ze směsného vzorku tří stolic. Odběry řádně označit, uložit v lednici při 2–8 °C a najednou doručit do laboratoře. Vyšetření z jednoho odběru stolice je možné, ale může dojít ke snížení citlivosti.

Uchovávání: Při teplotě 2–8 °C.

Transport: Při teplotě 2–8 °C nebo při pokojové teplotě.

Výtěr nasální (A), oropharyngeální (B), nasofaryngeální (C)

Indikace: Průkaz přítomnosti chřipkových virů a respiračních patogenů

Odběr. souprava: Suchý sterilní tampon, zalomit do sterilní zkumavky s odběrovým médiem.

Příprava: Ideálně na lačno. Nejméně hodinu před odběrem nejíst, nepít, nekouřit, nežvýkat žvýkačku, nevyplachovat si ústa vodou, nepoužívat ústní vodu a nečistit si zuby.

Provedení odběru: A. Nasální: Sterilní tampón šroubovitým pohybem zavedeme pod nosní skořepu a provedeme výtěr, tímto jedním tampónem provedeme výtěr i z druhé nosní dírky.

B. Orofaryngeální: Pacienta necháme před odběrem odkašlat se zavřenými ústy. Je důležité získat co nejvíce sekrece. Vložte sterilní odběrový tampon do krku, který představuje největší sekreci z červené oblasti stěny hrdla a maxilárních mandlí, abyste odebrali vzorek z krku. Mírně protřete bilaterální krční mandle a stěnu hrdla, abyste získali vzorek. Při vyjímání tamponu se prosím nedotýkejte jazyka.

C. Nasofaryngeální: Tampón jemně zasuňte přes nosní průduch těsně podél nosní přepážky a po spodní stěně nosní dutiny až k zadní stěně nasofaryngu. Několikrát jemně pootočte, tampón vytáhněte a vložte do transportní zkumavky s médiem. Plastové držátko – horní část tyčinky odlomte o okraj zkumavky a odložte. Zkumavku s tamponem pečlivě uzavřete šroubovacím víčkem. Pokud se provádí u téhož pacienta i výtěr nosní sliznice, pak lze oba materiály vzhledem k anatomické kontinuitě deponovat do jedné společné odběrové/transportní zkumavky.

Při odběru u dětí doporučujeme fixaci hlavy druhou osobou.

Uchovávání: Při teplotě 2–8 °C.

Transport: Při teplotě 2–8 °C, případně na ledu.

Výtěr urogenitální, výtěr z rekta

Indikace: Průkaz Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum, Trichomonas vaginalis

Odběr. souprava: Suchý sterilní tampon, zalomit do sterilní zkumavky s odběrovým médiem.

Příprava: Před odběrem z urogenitálního traktu by pacient neměl 2 hodiny močit.

Provedení odběru:  Sterilním odběrovým tampónem setřeme šroubovitým pohybem sliznici. Odběr ze sliznic musí být dostatečně razantní, aby došlo k setření epitelií.

Uchovávání: Při teplotě 2–8 °C.

Transport: Při teplotě 2–8 °C.

Klíště

Indikace: Průkaz Borrelia burgdorferi

Odběr. souprava: není žádná speciální, vhodná je čistá zkumavka bez aditiv, igelitový sáček či plastová krabička

Příprava: Bez přípravy.

Provedení odběru: Klíště vložte do zkumavky, igelitového sáčku nebo pevné plastové krabičky, pečlivě uzavřete a transportujte do laboratoře.

Uchovávání: Při teplotě 2–8 °C.

Transport: Při teplotě 2–8 °C.

Mikrobiologický preparát

Stěry z ran, dekubitů apod. je možno doplnit mikrobiologickým preparátem. Po odebrání vzorku na kultivaci je možno výtěrovkou se žlutým víčkem nebo vatovým tamponem na špejli znovu setřít defekt a otisknout na podložní sklíčko. Nechá se zaschnout a zabalí se do buničiny a alobalu. Před zabalením je možno fixovat rychlým protažením plamenem. Tato varianta není nutná. Podobně se zhotoví preparát na MOP (mikrobiální obraz poševní).

Odběrový tampon již není možné použít pro kultivaci (kontaminace ze sklíčka).

Vhodné pro rychlou orientaci, výsledek do 2 hodin po doručení, u kultivace je předběžný výsledek nejdříve za 19 hodin.

Četnost leukocytů pomůže k odlišení kolonizace a infekce.

Odběr hnisu, punktátu, sekretu

Odběr do sterilní zkumavky nebo do nádobky na odběr hemokultur. Na žádanku je nutno dobře označit, odkud materiál pochází. Transport by měl být rychlý, po nezbytnou dobu lze uchovat při teplotě +4 až +8 °C.

Odběr likvoru

Odběr se provádí do sterilní zkumavky, je naprosto nezbytný co nejrychlejší transport, uchovává se výhradně při pokojové teplotě, protože při +4 až +8 °C nepřežívá významný patogen Neisseria meningitidis. Je-li odběr proveden mimo pracovní dobu mikrobiologické laboratoře, lze odebrat do lahvičky na hemokultivaci, uložit do termostatu (+37 °C) či alespoň při pokojové teplotě. Z kapky likvoru zhotovit nátěr na podložní sklíčko.

Odběr moče

Důkladné poučení pacienta o způsobu omytí a správného odběru je základem pro získání správného výsledku. Odebírá se střední proud moče. Dodání do laboratoře je nutné nejpozději do 2 hodin po odběru, jinak může dojít k významnému zkreslení výsledku vyšetření. Je-li to nutné, uchovávají se moče v lednici. Pokud není možno zajistit rychlý transport, používá se sada URICULT, která obsahuje sterilní nádobku, do které se pacient vymočí, do moči se na cca 5 sekund ponoří kultivační půdy, které jsou také součástí sady, následně se moč vylije, souprava se uzavře a do transportu se nechá v termostatu při +37 °C. U tohoto typu odběru se musí psát datum i hodina odběru. Pouze tento materiál se na žádance značí jako URICULT. U ostatních močí je třeba odlišit, zda se jedná o moč spontánní, z permanentního močového katetru nebo o moč cévkovanou. Na žádanku je nutné psát jako typ materiálu “moč” a do komentáře přesnější určení. Zadání “močová cévka” užívejte pouze pro zasílanou močovou cévku.

Odběr na anaerobní vyšetření

Důležité je zamezení přístupu vzduchu k odebranému materiálu, pro výtěry se užívá výhradně výtěrovka se zápichovou půdou. Tekutý materiál se odebírá do stříkačky s jehlou, ze které se vytlačí vzduch a jehla se zapíchne do gumové zátky nebo se používá odběrová lahvička pro hemokultury s fialovým uzávěrem. Materiál na anaerobní vyšetření je vhodné vždy doplnit stejným vzorkem na aerobní kultivaci. Každý materiál na anaeroby je nutno rychle dodat do laboratoře z důvodu zvýšeného rizika úhynu bakterií. V nouzi se uchovává v lednici, kromě odběrové lahvičky, která se dává do termostatu.

Odběr na vyšetření Clostridium difficile je odlišný od odběrů na ostatní anaerobní vyšetření, protože ve vzorku se prokazuje toxin. Odebírá se vzorek stolice, která by měla být tekutá, do sputovky. U tohoto odběru není nutné dbát na sterilitu, do transportu uchovávat v lednici. Materiál na tato vyšetření je třeba vždy jednoznačně popsat.

Odběr na hemokulturu

Odebírají se do lahviček Bact/Alert.

Postup při odběru:

· lahvičky nechat vytemperovat na pokojovou teplotu a označit štítkem.

· odstranit plastikové víčko a lahvičku dezinfikovat alkoholem,

· kůži pacienta odmastit alkoholem a následně dezinfikovat, dezinfekci nechat zaschnout,

· odebrat 5–10 ml krve, která se sterilně přenese do lahvičky propíchnutím gumové zátky.

Doporučený interval mezi jednotlivými odběry je asi 15 minut. Lepší je poslat více vzorků současně, ideální je 1 anaerobní lahvička – fialová a 2 aerobní – modré. Nejlépe je odebírat krev při vzestupu teploty, před zahájením antibiotické terapie, pokud je možno, tak z periferie z různých míst. Na žádance je dobré označit místo odběru (periferie, centrální žilní katetr). Hemokultury se uchovávají po nezbytnou dobu v termostatu při +37 °C, není-li to jinak možné, tak při pokojové teplotě. Do těchto lahviček lze odebírat i jiné tekuté materiály, ale z těchto vzorků nelze zhotovit mikroskopický preparát.

Při balení lahviček do buničiny se použije přiměřené množství lepícího materiálu!

Odběr na průkaz Mykoplazmy a Ureaplazmy

Vyšetření se provádí ze vzorků z urogenitálního traktu, tzn. výtěr z uretry, výtěr z děložního čípku, resp. z vaginy a moč.  Používají se výtěrovky se žlutým víčkem, které se po odběru zalomí do lahvičky s transportním médiem. V případě moče se do media dává asi 0,2 ml moče. Skladovat lze max. 48 hod. při pokojové teplotě nebo 72 hod. v lednici.

Odběr vzorku tkáně, kanyly, katetry

Vkládají se do sterilních zkumavek nebo kontejnerů (tzv. sputovek). Je potřeba označit přesně o jaký materiál se jedná, rozlišovat na žádance kanyly a žilní katétry. Žilní katetry bývají kontaminované, pozor na sterilitu odběru. Pokud je to nezbytné, lze kanyly a katétry zalít sterilním fyziologickým roztokem, ale naředění může snížit záchytnost mikroorganismů.

Výtěry

Pro výtěry se používá komerčně dodávaná výtěrovka v uzavřeném plastikovém obalu sterilizovaná zářením. Před použitím je nutno zkontrolovat neporušenost obalu. Pro odběry se zajištěným rychlým transportem se používá výtěrovka se žlutým víčkem, transport musí být do dvou hodin po odběru, jinak se zhoršuje přežívání bakterií. Není-li možný včasný transport, používá se odběrová souprava s transportním mediem, do kterého se použitá výtěrovka zapíchne a tím se souprava uzavře. Takto odebraný materiál lze dodat do laboratoře do 24 hodin po odběru.

Pro výtěry z hůře dostupných míst (oko, ucho) je určen tampon na drátku – oranžové víčko.

Výtěr z rekta se provádí detoxikovaným tamponem, odběrovka s černým víčkem bez transportního média.

Pro průkaz campylobactera a yersinií odběr do soupravy s transportní půdou.

Výtěr z krku by se měl provádět nalačno, před ústní hygienou, při odběru pozor na kontakt výtěrovky s dutinou ústní nebo jazykem.

Výtěry a stěry z ran se odebírají výtěrovkou se žlutým víčkem nebo do transportního média, stírají se okraje ran nebo sekrece. Je vhodné označit přesně místo odkud byl odběr proveden, označení typu “stěr” není vhodné.